HPLC (nagyhatékonyságú folyadék-kromatográfia)
A HPLC (High Performance Liquid Chromatography), azaz a nagyhatékonyságú folyadék-kromatográfia alkalmazási területe a biokémia és az analitikai kémia. Az eljárás vegyületek elválasztására és mennyiségi meghatározására használható. A folyamatot a következő alkotók végzik: a kolonna (oszlop) tartalmazza az állófázist (kromatográfiás töltet), a pumpa nyomja át ezen a mobil fázist, a detektor a molekulák visszatartási idejét jelzi.
1. Milyen területre szánjuk a műszert?
A nagy teljesítményű folyadékkromatográfiából többféle típus létezik. Választhatunk a normál vagy fordított fázisú, méretkizárásos, ioncserés, vagy bioaffinitás alapú mérőműszert, melyek mind más-más alapelven működnek. Ehhez adjuk meg, hogy milyen területre szánjuk a mérőműszert pl.: víztisztításhoz, poliszacharidok molekulatömegének meghatározására stb.
2. Milyen HPLC oszlopot szeretnénk?
A HPLC oszlop belső átmérője a kolonnára vihető mennyiséget befolyásolja. A szűk átmérőjű kolonnák nagyobb érzékenységűek és kisebb az oldószer fogyasztásuk, viszont ez kis terhelhetőséget eredményez. A korszerű berendezések rendelkeznek oszloptermosztáttal is, hiszen a reprodukálható elválasztás fontos feltétele az azonos hőmérséklet.
3. Milyen állófázist szeretnénk alkalmazni?
A leggyakrabban használt állófázis a szilícium-dioxid. Több szemcseméretben is készül (jellemzően 5 μm). A kisebb szemcseméret általában jobb szétválasztást eredményez, azonban ez nagyobb nyomást is kíván. Ez azt jelenti, hogy a szemcsék méretének felezésekor a szétválasztás teljesítménye a kétszeresére nő, azonban ehhez négyszeres nyomás szükséges.
4. Milyen pórusméretet szeretnénk?
Nagyobb fajlagos felülettel rendelkeznek a kisebb pórusok. Nagyobb vizsgálandó anyagok (makromolekulák) esetén nagyobb pórusméret alkalmazása célszerű.
5. Mekkora nyomású pumpákat akarunk?
A pumpák feladata, hogy egyenletes nyomást és áramlási sebességet biztosítsanak. Kisebb szemcseméret alkalmazása mellett nagyobb nyomás szükséges. Ajánlatkéréskor adjuk meg a kívánt értéket bar-ban.
6. Milyen érzékenységű berendezést szeretnénk?
Végül érdemes szem előtt tartani a mérő érzékenységét, mai szintén használatfüggő. Egyes modellek kimutatási határa igen alacsony nanogram nagyságrendben található.
7. Igen jelentős különbségek lehetnek a különböző cégek áraiban és feltételeiben, ezért mindig több cég ajánlatát kérjük be és hasonlítsuk össze. Ezt 2 perc alatt, minden kötelezettség nélkül megtehetjük a következő ajánlatkérő ív kitöltésével.
| Szerző: Kócsi Norbert |
